J Ethnopharmacol：加味过敏煎通过HIS/PAR-2通路调节特应性皮炎小鼠肥大细胞脱颗粒

背景：过敏煎（GMD）由防风、银柴胡、乌梅、五味子、甘草组成，是祝谌予先生自创的一种临床常用的中药。传统上，它被用来治疗所有过敏性疾病。加味过敏煎(JWGMD，GMD加入蝉蜕、白鲜皮)目前用于敏感性皮肤初始治疗后的干预。虽然具有显著的临床治疗效果，但肥大细胞脱颗粒在治疗特应性皮炎(AD)中的确切作用尚不清楚。

目的：GMD和JWGMD均可治疗过敏性疾病，而JWGMD主要治疗皮肤过敏。该研究旨在探讨JWGMD对2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱导的AD小鼠肥大细胞脱颗粒的潜在影响，并研究JWGMD缓解疾病进展的有效性，进一步为治疗AD提供特异性的治疗靶点。

方法：观察DNFB致模型小鼠抓伤次数及皮肤损伤情况，并采集皮肤组织进行后续测量。采用H&E染色观察小鼠背部皮肤组织病理变化，甲苯胺蓝染色检测小鼠皮肤肥大细胞脱颗粒情况，ELISA实验分析组胺(HIS)、肥大细胞胰蛋白酶(MCT)表达与肥大细胞脱颗粒的关系。western blot (WB)检测AD小鼠蛋白酶活化受体2 (PAR-2)、组胺1受体(H1R)、H2R、H4R和MCT蛋白的表达。免疫荧光分析(IFA)进一步证实了皮肤中PAR-2、H1R、H2R、H4R和MCT蛋白的定位。采用实时荧光定量PCR (qPCR)检测皮肤病变中PAR-2、H1R、H2R和H4R mRNA水平，进一步阐明JWGMD对AD肥大细胞脱颗粒作用的机制。

此外，采用UPLC-QE-MS非靶向代谢组学分析，分析了GMD和JWGMD之间代谢物丰度的差异，并利用这些结果鉴定了JWGMD中可能具有止痒、抗炎和抑制肥大细胞脱颗粒作用的活性成分。

结果：DNFB间歇刺激后，皮肤病变表现为广泛脱屑、干燥、结痂、皮肤增厚、轻微出血。两种处理都缓解了这种现象，减少了划痕的数量，其中JWGMD是最有效的。JWGMD能显著减少小鼠炎症细胞浸润、水肿和部分毛细血管新生，减轻肥大细胞脱颗粒。

ELISA结果显示，JWGMD可提高MCT和HIS蛋白水平。WB和IFA结果显示，JWGMD降低了皮肤病变中PAR-2、H1R、H4R和MCT蛋白的表达水平，且蛋白主要定位于表皮层，而H2R蛋白水平升高，且主要定位于真皮层。此外，JWGMD下调PAR-2、H1R、H2R和H4R mRNA的表达。

通过UPLC-QE-MS非靶向代谢组学分析，检测到JWGMD中含有抗炎和抗过敏活性物质，如甲基丁香酚、白鲜碱和芥子碱。

结论：JWGMD可能通过甲基丁香酚、白鲜碱、芥子碱等物质缓解瘙痒，其机制可能与抑制AD模型小鼠HIS/PAR-2通路，进而调节肥大细胞脱颗粒的自我扩增有关。JWGMD是一种治疗AD的潜在药物。因此，值得继续关注和研究。